Real Time PCR untuk Melihat Ekspresi Gen

Real time PCR by drh. Medania Purwaningrum, M. Sc. Ph.D
Dosen Departemen Biokimia dan Biologi Molekuler
Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Gadjah Mada

Dokter Medania mengerjakan penelitian di bidang Biologi Molekuler dan Biologi sel.
Isolasi RNA dari stem cell kuda, anjing dan kucing untuk karakterisasi stem sel dengan menganalisis hasil ekspresi gen.
Konsentrasi hasil isolasi RNA dari stem cell kuda, anjing, dan kucing di cek menggunakan nano drop untuk lanjut ke tahap reverse transcriptase PCR (RT-PCR) dengan konsentrasi RNA 1 ug/ul untuk mendapatkan complementary DNA (cDNA).
Convert RNA menjadi cDNA sebaiknya dilakukan di hari yang sama/langsung setelah isolasi RNA dan pengukuran konsentrasi RNA untuk menghindari penurunan konsentrasi RNA setelah freeze-thaw.
Setelah mendapatkan cDNA kita dapat melihat ekspresi gen yang kita inginkan dengan real time PCR (qPCR) dinormalisasi dengan kontrol negatif dan beberapa housekeeping gene seperti 18S maupun GAPDH.
Kemudian cDNA dapat disimpan pada freezer dipindah-20°C untuk analisis ekspresi gen dengan real time PCR.
Hasil isolasi RNA (mRNA) disimpan pada freezer -80°C agar tidak cepat rusak (sifatnya tidak stabil) dan menjaga konsentrasi RNA nya agar tidak turun.

Penelitian ini mendukung beberapa poin Sustainable Development Goals (SDG), antara lain SDG 3 Kehidupan sehat dan sejahtera, SDG 4 Pendidikan Berkualitas, SDG 9 Industri, inovasi dan infrastruktur dan SDG 15 Ekosistem darat.